TECNICAS HISTOLOGICAS EN VEGETALES

Fig. 1 Diferentes recipientes que contenian alcoholes para la deshidatacion



Fig. 2. Horno donde se calientan las muestras para la incubacion



Fig. 3. Corte al microtomo

Fijación en: Solución en AFA

- 85 c.c de alcohol al 80%
- 10 c.c de formol al 37-40%
- 5 c.c de ácido ácetico glacial
- Tiempo de fijación 24 horas como mínimo

Ventajas: Preserva la mayoría de las estructuras celulares en casi todas las plantas jóvenes, compatible con la mayoría de los colorantes y se puede pasar del fijador al primer alcohol.

Desventajas: No se puede guardar permanentemente en el fijador AFA, lo mejor es guardarlo en alcohol etílico al 70% no es recomendado para tejidos meristemáticos y tejidos donde queramos ver mitosis y cromosomas.

Deshidratación: Deshidratación con alcoholes ascendentes: Alcohol 70º-80º-90º 100% I, 100%II, 100%III. Si el `proceso es manual dejar el tejido 24 horas en cada alcohol y como mínimo 12 horas.

Aclaramiento: Xilol I y Xilol II, 6 horas en cada uno (el xilol endurece los tejidos vegetales en especial el tejido leñoso). En remplazo del xilol utilizamos alcohol butílico terciario o terbutanol que se calienta al baño de maria para diluirlo.

1. Terbutanol 1 parte por 3 de alcohol etílico al 100%

2. Terbutanol 2 partes con 2 de alcohol etílici al 100%

3. Terbutanol 3 partes con 3 de alcohol étílico al 100%

4. Terbutanol puro.

Seis horas en cada uno de los cuatro pasos a una temperatura de 37ºc

Inhibición: De xilol a pararafina I, parafina II, 12 horas en cada una. (temperatura 53º, 56) si es con terbutanol una parte de terbutanol y una parte de parafina a una temperatura de 30º a 40º; temperatura de la parafina (53º 56º) hasta que el terbutanol se evapore, y colocamos el tejido vegetal en parafina pura hasta por 72 horas, hasta que no huela más a terbutanol.

Inclusión: En parafina donde se coloca el tejido vegetal según la orientación del corte en moldes plásticos.

Corte al micrótomo: El corte al microtomo se realizo de 15 micras, que se toman en el portaobjetos en el flotador de tejidos y se llevan a un horno incubadora a una temperatura de 37º a 40º por 12 horas.

Coloración: Safranina 4 gr, Methyl celloselve, Ethanol 50% 200 c.c, acetato de sodio 4 gr, Formol puro 8 c.c.

Disolver la safranina en el metíl celloselve en un agitador magnético y agregamos los otros componentes en el mismo orden. Tiempo de tinción en la safranina o por 12 horas, las hojas mayor tiempo. Lavar con agua corriente muy suave.

Alcohol ácido pícrico solución saturada

Alcohol I de 70º, 80º, y 90º.

Fast green FCTCI42053

Solución madre de Fast- Green: Fast-green FCT 3 gr, etanol absoluto 50 c.c y metil celloselve 50 c.c y los 3 gr de Fast-green FCT.

Solución de trabajo: Fast-green FCT 1 parte y 3 partes de esencia de clavos; agregar safranina al gusto por un minuto. Deshidrataciones con alcoholes ascendentes aclarar en xilol y montar con resina.